21世纪是生物科学蓬勃发展的年代，各类生物制品成为许多生物科技公司一大重点研发领域，包括重组蛋白与抗体产品、mRNA产品、基因治疗产品、CAR-T产品、疫苗产品等等，无不例外涉及到细胞建库的问题。

      细胞库建立与充分的检定对后续药物研发以及商业生产环节都至关重要，能确保生产的可持续性及产品的一致性，细胞库被污染将直接影响产品的安全性，同时给企业带来巨大的损失。

      中国、美国、欧洲等药典明确规定必须对细胞库进行充分检定后才可用于生产，同时也是CDE和FDA审查的必审项目，需高度重视。

      华微检测结合中外法规和实际案例，对生物制品的细胞库检定内容归纳解读为三部分：微生物检查篇、内外源病毒检查篇、特异性病毒检查篇。

      本篇将详细介绍微生物检查部分。

      

      微生物检查又包括细菌、真菌检查、分枝杆菌检查以及支原体检查，其中细菌、真菌检查、分枝杆菌检查属于无菌检查，其主要的检测依据为《中国药典》2020年版 三部通则 1101无菌检查法。无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器械、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。

      值得注意的是，若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发生微生物污染。

      目前USP、EP的无菌检查法已通过ICH完成协调一致，《中国药典》2020年版的无菌检查法与他国药典的各项主要参数基本也一致，主要差异点见表1：

      华微检测可参照《中国药典》（2020版）三部通则1101无菌检查法在B+A环境中进行无菌检查，可提供薄膜过滤法和直接接种法，如下图1：

铜绿假单胞菌

金黄色葡萄球菌

黑曲霉

阴性对照

      2020年版《中国药典》指出主细胞库、工作细胞库、病毒种子批、对照细胞以及临床治疗用细胞进行支原体检查时，应同时进行培养法和指示细胞培养法（DNA染色法）。病毒类疫苗的病毒收获液、原液采用培养法检査支原体，必要时，亦可采用指示细胞培养法筛选培养基。也可采用经国家药品检定机构认可的其他方法。

      培养法作为支原体检测的金标准，在中国药典、美国药典和欧洲药典中都是作为基本的检测方法而使用，其之间的主要差异点如表2~3：

      华微检测可参照《中国药典》（2020版）三部通则3301支原体检查法的要求进行，可提供符合法规要求的支原体检查，包括培养法和指示细胞培养法，培养法检测的灵敏度高于中国药典要求，肺炎支原体达到10^-9，口腔支原体达到10^-5，如下图2~5：

图5 荧光显微镜下的口腔支原体

     华微检测实验室配备有多间加强型生物安全二级实验室（P2），已在广州市备案，实验室按照GMP质量体系运行，且通过CMA、CNAS评审，B+A环境，满足无菌及相关病毒检测的环境要求。

     遵循FDA、CHP、EP、ICH等多个国内外法规和指导原则进行设计，建立了全面的细胞库检定操作规程，主要包括以下几个方面：细胞鉴别、无菌检查、支原体检查、内外源病毒因子检查、成瘤性/致瘤性检查、染色体检查等。

     检测项目及方法见下表4：